# Winter 2011 – Resistent stivelse og rødt-kjøtt-induserte O6-MeG-addukter i musekolon (Australia, CSIRO/Flinders)

**Kilde:** Winter J, Nyskohus L, Young GP, Hu Y, Conlon MA, Bird AR, Topping DL, Le Leu RK. «Inhibition by resistant starch of red meat-induced promutagenic adducts in mouse colon.» Cancer Prev Res (Phila) 2011;4(11):1920–1928. DOI 10.1158/1940-6207.CAPR-11-0176. PMID 21885815 (Europe PMC: ikke OA, ingen PMC-kopi).

**Lesestatus:** Siden ligger på aacrjournals.org og er gratis å lese der, men curl ble blokkert (HTTP 403). Teksten er derfor lest gjennom WebFetch, med tre målrettede uttrekk av Methods, tabell 1, Results og Discussion. Det jeg fikk ut er ordrette korte sitater og tabelltall, ikke hele PDF-en. Fulltekst-PDF finnes ikke i Drive: `winter2013.pdf` i Nedlastinger er en annen artikkel. **Bør lastes ned manuelt** som PDF hvis figurverdier (O6-MeG-gjennomsnitt) skal brukes.

## Design
- 72 hannmus av villtype, 8 uker gamle, fordelt på 6 diettgrupper med 12 i hver. Forsøket varte i **4 uker**, med avføringsprøver etter 3 uker.
- Diettene var modifisert AIN-76 med 15 % eller 30 % protein fra kasein eller rødt kjøtt. I tillegg var det grupper med 10 % HAMS (high-amylose maize starch), som gir om lag 5 % resistent stivelse.
- Kjøttet: «Lean, minced rump steak was purchased, cooked at medium temperature on a gas hot plate», deretter «oven dried overnight before grinding to powder». Pulveret var «total protein content … 75%» og «Moisture content … 10%».
- Kjøttandel (tabell 1, g/100 g diett): **20,43** (lav) og **40,9** (høy). Fett: 12,5 % solsikkeolje i alle grupper, og lard brukt til å balansere mettet fett.
- **Kalsium:** fotnote c til tabell 1: «AIN-76 vitamin and mineral mixtures with modified calcium at 0.5 mg/g, phosphorus at 3.6 mg/g». Fosfor på 3,6 mg/g svarer til normalnivået i AIN-76 per gram diett. Det tyder på at tallene gjelder per gram diett, og da er **Ca = 0,05 % av dietten**. Det er en lavkalsiumdiett, lavere enn 0,06–0,10 % i påstand (b). AIN-76 standard ligger på ca. 0,5 %. (Tolkningen er min. Artikkelen sier ikke «% of diet» eksplisitt.)

## Hemdose (ikke målt i artikkelen, mitt anslag)
Artikkelen måler ikke hem og nevner hem bare én gang, i innledningen. Anslaget bygger på disse forutsetningene: stekt magert storfekjøtt har 1,5–2,5 mg hem-Fe per 100 g (våtvekt), med 40 % tørrstoff. Pulveret har 90 % tørrstoff, så faktoren er 0,9/0,4 = 2,25.
- Pulver: 1,5–2,5 mg/100 g × 2,25 = 3,4–5,6 mg Fe/100 g = 34–56 µg/g ÷ 55,85 = **0,60–1,0 µmol hem/g pulver**
- Lav kjøttdiett: × 0,2043 = **0,12–0,21 µmol/g diett**
- Høy kjøttdiett: × 0,409 = **0,25–0,41 µmol/g diett**

Det tilsvarer omtrent 1,2–10 × det humane nivået på 0,04–0,1 µmol/g. Lavkjøttgruppen ligger altså nær humant inntak, men den er ikke inne i spennet 0,04–0,1.

## Endepunkter
Bare **surrogatendepunkter**: O6-MeG (immunhistokjemi, distalt kolon), apoptose, proliferasjon, kryptehøyde, fekal pH, p-kresol, fenol, ammoniakk og SCFA. Ingen tumorer, ingen ACF/MDF, og ingen initiator.

## Hovedresultater (P-verdier fra teksten; gjennomsnitt finnes bare i figur 1)
- O6-MeG: rødt kjøtt > kasein, **P < 0,018**. Proteinmengde hadde ingen effekt (**P < 0,92**, slik det står). Resistent stivelse reduserte nivået (**P < 0,01**).
- p-kresol var høyere med rødt kjøtt (P < 0,0001). Apoptose ble redusert av RS (P = 0,001, tabell 3).
- O6-MeG korrelerte med fekal pH (r = 0,377, P = 0,002).
- At dobbel kjøttmengde (40,9 mot 20,43 %) ikke ga flere addukter, betyr at studien **ikke viser dose–respons** innenfor kjøttarmene.

## Sitater
- «It has not been possible to examine for NOCs in this study because of sampling limitations.» (Discussion). NOC/ATNC ble altså ikke målt.
- «The relevance of DNA adduct formation at the luminal surface of cells and cancer risk remains unclear» (Discussion)
- «Although O6MeG is not the most predominant alkyl DNA adduct in number» (Discussion)
- Hem nevnes bare i innledningen: «increased dietary heme from hemoglobin in red meat forming reactive oxygen species».

## Konklusjon
- (a) Påstanden blir verken svekket eller styrket i kjernen. Dette er den dyrestudien jeg har sett som ligger nærmest humant hemnivå (anslått 0,12–0,21 µmol/g i lavkjøttarmen). Endepunktet er likevel et surrogat (O6-MeG), og det er ingen dose–respons mellom 20 % og 41 % kjøtt. Påstanden om at ingen studier har testet 0,04–0,1 µmol/g med tumorendepunkt, står.
- (b) Lavkalsiumdiett, sannsynligvis 0,05 % Ca. Det passer med mønsteret i (b), men er ikke en test av kalsiumeffekten.
- (c) Ikke berørt, siden studien ikke har tumorendepunkt.
- (d) Svakt relevant. Studien forutsetter NOC-mekanismen, men måler ikke NOC og isolerer ikke hem. Den kan ikke brukes som evidens for at det er hem som katalyserer NOC.