# K15 – Winter 2014 kontroll

Kilde: /home/claude/drive/Hemjern/winter2014.pdf (Drive fileId [Drive-id], filnavn winter2013.pdf), tekst: /home/claude/drive/Hemjern/winter2014.txt

## Sitering (bekreftet fra PDF)
Winter J, Young GP, Hu Y, Gratz SW, Conlon MA, Le Leu RK. "Accumulation of promutagenic DNA adducts in the mouse distal colon after consumption of heme does not induce colonic neoplasms in the western diet model of spontaneous colorectal cancer." Mol Nutr Food Res 2014;58:550–558. DOI 10.1002/mnfr.201300430. Mottatt 14.06.2013, akseptert 07.08.2013 (© 2013).
- Merk: tittelen er IKKE "Long-term dietary heme iron and red meat intake... colonic neoplasia". Tittelen i kildelisten bør rettes.

## 1. Design
- Art/stamme: "225 eight-wk-old wild-type c57bl/J male mice" (s. 551, 2.1).
- Grupper: kontroll, kontroll+RS, hem, hem+RS. Korttid 4 uker: n = 12 per gruppe (Tabell 2); langtid 18 mnd: n = 40 per gruppe (Tabell 3). "A total of 60 mice consumed diets for 4 wk (short term) and 160 mice were on diets for 18 months (long term)" (s. 552). (60 ≠ 4×12 = 48; slik står det.)
- Hem-dose: hemin 0,01304 g/100 g diett (Tabell 1, s. 552); fotnote c: "Hemin is at 0.2 µmol/g of total diet." Tekst: "The amount of heme used in this study is at a final concentration of 0.2 µmol/g (supplied as hemin chloride, Sigma ...)" (s. 552). Kontroll: 130,4 mg hemin/kg ÷ 651,9 g/mol = 0,20 µmol/g. Altså 0,2 µmol hem per g diett.
- Rødt kjøtt: ingen. Renset AIN-76-basert "western diet"-modell (Newmark), protein 17,6 % kasein. Hem-dosen er valgt for å "resemble the heme content from a high red meat diet" (s. 552); diskusjonen: 30 % rødt kjøtt-diett ≈ 0,14 µmol/g, og "0.2 µmol is very similar to that of the high red meat diet of 30%" (s. 556).
- Kalsium: lavt. Tabell 1 fotnote a: "AIN-76 vitamin and mineral mixtures with modified calcium at 0.5 mg/g, phosphorus at 3.6 mg/g, folic acid at 0.23 mg/g, and vitamin D3 at 0.11 IU/g." (0,5 mg/g = 0,05 % Ca; Newmark-modellen er bevisst lav på Ca og vit D.)
- Varighet: 4 uker og 18 måneder. 18 mnd valgt som avslutning pga. vekttap i hem-gruppen og tidlige tap av mus (s. 556).

## 2. Svulstutfall
- Tabell 4 (s. 555), "Main effects of dietary interventions on colon neoplasm incidence" (hovedeffekter, poolet over RS):
  - No Heme: 4.45 % ; Heme: 0 % ; p = 0.134 (Fisher's exact)
  - No RS: 3.35 % ; RS: 1.1 % ; p = 0.523
- Antall svulster/mus med svulst per gruppe oppgis IKKE, heller ikke endelig n etter tap. Ingen per-gruppe (4 grupper) tall.
- Tekst: "Although it appears heme lowered neoplasm incidence in the colon, there were no statistically significant differences in colon neoplasm incidence for any of the dietary interventions (Table 4)." (s. 554). Abstract: "The incidence of colon neoplasms was not different between any interventions."
- ACF/MDF: ikke målt. ACF nevnes kun fra Pierre 2003 (0,25 µmol/g, færre men større ACF).
- O6-MeG: ingen forskjell etter 4 uker; etter 18 mnd ingen forskjell hem vs. hem-fri (s. 554, 3.3); men økning over tid kun i hem-dietter: "Diets that contained heme (p < 0.01) or heme with RS (p < 0.001) showed a significant increase in O6 MeG DNA adduct accumulation over time; whereas diets without heme ... showed no significant difference" (s. 554). 8-oxo økte over tid i alle grupper.
- Ellers: hem-mus hadde lavere kroppsvekt ved 18 mnd (48,0 vs 58,3 g, p < 0,01; Tabell 3).

## 3. Proliferasjon og kalsium
- Korttid: "In the short term, heme at 0.2 µmol/g in the diet increased cell proliferation (Fig. 1B) ... (p < 0.05)" (s. 554).
- Kronisk: "After 18 months on experimental diets, those mice that were fed heme showed no changes in proliferation, crypt height, apoptosis, or DNA adduct levels compared to mice fed a heme-free diet (Fig. 1A–E)." (s. 554). Over tid: hem senket apoptose (p < 0,01); proliferasjon økte med alder i alle grupper.
- Konklusjon: "heme to increase proliferation in the short term, inhibit apoptosis over the long term, and increase O6 MeG adducts ... although these changes did not affect colonic neoplasms" (abstract).
- Kalsium: forfatterne diskuterer IKKE kalsium. Eneste omtale er Tabell 1 fotnote a (0,5 mg/g) og referansetitlene Pierre 2003 ("low-calcium diet") og Newmark 2009 ("modulation by calcium and vitamin D").

## 4. Vurdering av artikkelens setninger
- "Winter 2014 (18 mnd): ingen økning i svulster" – STØTTES. Varighet 18 mnd, ingen økning (numerisk lavere, p = 0,134).
- Dosepunkt 0,2 µmol/g – STØTTES (Tabell 1 fotnote c; s. 552).
- "én finner ingen (Winter 2014: 0 mot 4,5 prosent, ikke signifikant)" – tallene STØTTES (0 % vs 4,45 %, p = 0,134), men: **hem-gruppen hadde 0 %, ikke-hem 4,45 %**. Formuleringen "0 mot 4,5 % i hem-gruppens disfavør" er **reversert/feil** – retningen er i hem-gruppens favør (numerisk). Anbefalt formulering: "0 prosent med hem mot 4,5 prosent uten (p = 0,13)". Merk også at dette er poolede hovedeffekter (hem ± RS vs. kontroll ± RS), ikke en ren to-gruppe-sammenlikning, og at absolutte tall ikke oppgis.
- Kontekst verdt å nevne: lav-kalsium-diett (0,5 mg/g), renset diett uten kjøtt, ingen kjemisk initiator; vekttap i hem-gruppen kan ha påvirket.